牛乙酰（acetylCoA）ELISA試劑盒

 牛乙酰（acetylCoA）ELISA試劑盒

?產(chǎn)品信息

【用途】

該試劑盒采用“一步"夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）體外定量檢測血清、血漿、組織、細(xì)胞或其他相關(guān)生物液體中acetylCoA 濃度。

【檢測原理】

將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，將未結(jié)合的抗體洗凈后再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計(jì)算樣品濃度。

【產(chǎn)品內(nèi)容】

【特異性】

可檢測樣本中的acetylCoA , 且與其它類似物無明顯交叉反應(yīng)。

【重復(fù)性】

板內(nèi)，板間變異系數(shù)均<10%

【批內(nèi)差】

取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進(jìn)行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD值。

【批間差】

選取3個(gè)不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本定量測定，每個(gè)樣本使用同一試劑盒重復(fù)測定8次，分別計(jì)算不同濃度樣本的平均值及SD值。

【精密度】

精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV表示。CV（%）=SD/mean×100  CV<10% Inter-批間差: CV<13%

【穩(wěn)定性】

經(jīng)測定，試劑盒在有效期內(nèi)按推薦溫度保存，其活性降低率小于5%。 為減小外部因素對試劑盒破壞前后檢測值的影響，實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件需盡量保持一致，尤其是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫度、濕度及溫育條件。其次由同一實(shí)驗(yàn)員來進(jìn)行操作可減少人為誤差。

 牛乙酰（acetylCoA）ELISA試劑盒

?實(shí)驗(yàn)所需自備物品

1、450±10nm濾光片酶標(biāo)儀（建議儀器使用前預(yù)熱）  

2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.  

3、Eppendorf 移液器.    

4、蒸餾水或去離子水.    

5、脫脂棉吸水紙.  

6、37℃恒溫箱.    

7、100ml和1000ml量筒.

影響ELISA試劑盒曲線的因素

一 OD值不正常的可能原因是：

1、試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃；

2、溫度控制不好，控制正確溫度；

3、孵育時(shí)間不準(zhǔn)確，控制孵育時(shí)間；

4、洗滌時(shí)沖擊力太大、浸泡時(shí)間過長、洗滌次數(shù)增 加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干；

5、陽光直射，對著風(fēng)直接吹，避風(fēng)避光；

6、酶標(biāo)儀的波長錯(cuò)誤，酶標(biāo)儀的波長450nm；

7、抗體的稀釋錯(cuò)誤，正確的稀釋抗體；

8、水質(zhì)問題，用娃哈哈礦泉水代替。

二 白板的可能原因是：

1、洗滌液配制錯(cuò)誤，正確的配制洗滌液；

2、少加液體（錯(cuò)加液體），正確的步驟加液體。

三 無梯度可能原因是：

1、標(biāo)準(zhǔn)品也污染，換標(biāo)準(zhǔn)品點(diǎn)板；

2、OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次；

3、人為點(diǎn)板，不要點(diǎn)板。

四 線性不好可能原因是：

OD值不正常，控制溫度時(shí)間在做一次。