土壤中磷脂脂肪酸（PLFA）的測定

PLFAs是幾乎所有活體細胞膜的主要成分，周轉速率極快且隨細胞死亡而迅速降解，脂肪酸結構與種類多樣，對環境因素敏感，分析結果重復性較好。既可用簡單試劑和設備測定由PLFAs轉化的磷酸鹽以確定微生物總量，也可以根據不同菌群的特定脂肪酸C鏈長度、飽和度及羥基等取代基位置差異研究特殊功能菌群。在微生物定量及活力測定方面，PLFAs與微生物量C、底物誘導呼吸（SIR）及ATP等測定方法所得結果十分吻合。因此，PLFAs在土壤微生物學研究中很有潛力。

磷脂脂肪酸在土壤中的功能主要包括以下幾個方面：

（1）作為細胞膜的組成成分，參與微生物的細胞結構和功能。

（2）可以作為能源來源，供給微生物進行代謝和生長。

（3）參與土壤中的有機質的分解和循環過程。

（4）對土壤中的酶活性和微生物群落結構具有調節作用。

實驗步驟

（1）稱3 g土壤與15 ml 0.2M甲醇化的KOH混勻，放入離心管中。

（2）在37℃培養1 h，每10 min漩渦震蕩一次。

（3）加入3 ml 1.0 M冰醋酸10 ml正己烷，分層。

（4）4800 r離心15 min。

（5）取上清移至試管，在氮氣下吹干。

（6）將試管內磷脂脂肪酸溶解于0.5 ml 1:1甲基叔丁基醚:正己烷，轉移到氣質聯用色譜分析用小管待分析。

將處理好的樣品用Agilent 6890GC / 5973 MS氣質聯用儀進行分析，參數設定如下：

色譜柱：利用處理后的石英毛細管柱（0.25 mm×30 nm×0.25 um）。

樣口溫度為250℃，不分流進樣。

采用恒流模式，流速為0.8 ml/min，載氣為高純氦氣。

程序升溫：80℃（保持2 min），以50°C/min的速度升至150 ℃（保持2 min），以2.5°C/min的速度升至195°C（保持3 min），再以2.5°C/min的速度升至240℃（保持5 min）。

電離方式：EI（70eV）

離子源溫度：150 ℃

四極桿溫度：230 ℃

接口溫度：280 ℃

掃描方式：SIM

C14:0是外標物

磷脂脂肪酸含量計算公式

PLFA（nmol/g土樣）=（PPLFA × S × V）/（POSTD × D × R × W）

式中PPLFA和POSTD分別是樣品和標準物質的峰值面積，s為外標標準物質的濃度（ng·ul-1），V為樣品的測定體積（ul），R為分取倍數，D為稀釋倍數，W為烘干土質量（g）。