不了解小鼠白介素Elisa的操作步驟？看一眼就懂了！

　　小鼠白介素Elisa試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)技術(shù)。特異性抗小鼠IL-4抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和生物素化的檢測(cè)抗體，經(jīng)過孵育，樣本中存在的IL-4與固相抗體和檢測(cè)抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素。洗滌后，加入顯色底物，避光顯色。加入終止液終止反應(yīng)，在450nm波長(zhǎng)(參考校正波長(zhǎng)540nm或570nm)測(cè)定吸光度值。

　　
 

　　不了解小鼠白介素Elisa的操作步驟？看一眼就懂了！

　　

　　1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　

　　2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　

　　4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

　　

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　

　　6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　

　　7、溫育：操作同3。

　　

　　8、洗滌：操作同5。

　　

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘。

　　

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

　　

　　11、測(cè)定：小鼠白介素Elisa以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。