細(xì)胞增殖檢測——EdU檢測法

細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征，指細(xì)胞在周期調(diào)控因子的作用下，通過DNA復(fù)制等反應(yīng)，完成細(xì)胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中細(xì)胞的數(shù)量變化，進(jìn)而反映細(xì)胞的生長狀態(tài)及活性，目前廣泛應(yīng)用于腫瘤生物學(xué)，分子生物學(xué)，藥代動(dòng)力學(xué)等領(lǐng)域。

細(xì)胞增殖檢測的方法眾多，應(yīng)用非常廣泛，按檢測原理主要分為4 類：檢測DNA合成、檢測代謝活性、檢測細(xì)胞增殖相關(guān)抗原和檢測ATP濃度。其中，細(xì)胞DNA合成檢測是通過測定細(xì)胞的DNA合成量來評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力，直接測定DNA合成是檢測細(xì)胞增殖最準(zhǔn)確的方法，它是測定物質(zhì)毒性、評(píng)估藥物安全評(píng)價(jià)、判斷細(xì)胞健康、細(xì)胞增殖等研究方向常用方法之一，常用的檢測試劑主要是EdU、BrdU等。

實(shí)驗(yàn)原理

EdU（5-Ethynyl-2'-deoxyuridine）與BrdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，它們能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶(T)滲入正在復(fù)制的DNA分子，然后分別利用免疫熒光技術(shù)、與Apollo熒光染料特異性反應(yīng)檢測細(xì)胞增殖情況。

傳統(tǒng)的BrdU有一大缺點(diǎn)，就是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，但這就破壞了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問題。而EdU檢測法更簡單、更快速、更準(zhǔn)確，不需要嚴(yán)苛的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理，有效地避免了樣品損傷，有助于在組織、器官的整體水平上觀測細(xì)胞增殖的真實(shí)情況，具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。這是一種新型的非放射性同位素細(xì)胞增殖檢測的方法，在細(xì)胞培養(yǎng)、實(shí)體組織及臨床研究中得到了廣泛的應(yīng)用。該技術(shù)可用于細(xì)胞成像、流式、細(xì)胞示蹤、DNA損傷修復(fù)檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等。