茁彩生物通用的樣本處理方法

茁彩生物通用的樣本處理方法

• 土壤：

  稱取1g土壤，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清。

• 糞便：

  稱取1g糞便，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工將標本充分混勻。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清。

• 咽拭子：

  加入2g的pH7.2-7.4左右的PBS，溶解咽拭子頭部，搖勻，用鑷子取出咽拭子并擠干液體，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清。分裝一份待檢測，其余冷凍備用，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。如果是測分泌蛋白，直接取上清檢測，測試細胞內蛋白，要破碎細胞。

• 植物標本(精提):
  1、 稱取0.1g（誤差±3%以內）新鮮植物組織樣本，在液氮中充分研磨；
  2、 加入1ml的提取液（80%甲醇）, 置于-20度過夜；
  3、 于4度，8000rpm，離心20分鐘，取上清；
  4、 上清液過C-18固相萃取柱。具體步驟是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上樣→收集樣品→移開樣品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%yi mi（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循環。過柱后的樣本真空干燥或氮氣吹干，保存備用；
  5、 上樣前加入pH7.4 PBS緩沖液（1ml定容）。混勻后室溫放置30分鐘，然后4度離心（8000rpm，15分鐘），取上清并暫時保存于4度待用。

• 植物標本(推薦):

  用預冷的 PBS (0.01mol/L, pH=7.2-7.4)沖洗組織，去除殘留物質（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的 PBS（一般按 1:9 的重量體積比，比如 1g 的組織樣品對應 9mL 的 PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在 PBS 中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。后將勻漿液于 5000×g 離心 5~10 分鐘，取上清檢測。

• 牛奶：

  用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

• 蜂蜜：

  用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

• 培養的細胞:

  A、動物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融（如果反復凍融，破碎效果不好，就采用超聲波破碎），以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

  B、植物細胞：用PH7.2-7.4的PBS稀釋細胞懸液，使細胞濃度達到100萬/ml左右，置于冰盒上，用超聲破碎儀，設置破碎2s，冷卻30s的方式，充分破碎細胞，以使細胞破壞并放出細胞內成份。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

  C、組織的細胞切割標本后，稱取1g組織，加入9g的pH7.2-7.4左右的PBS，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），去除上清，再用pH7.2-7.4左右的PBS小心洗滌沉淀的細胞三遍。再用上述的細胞破碎方法破碎細胞。

• 尿液：

  用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

• 胸腹水：

  用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

• 腦脊液：

  用無菌管收集，2-8℃條件離心20分鐘左右（2000-3000轉/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

   

• 樣本收集注意事項:

  1、不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

  2、標本采集后盡快進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

  3、我們羅列的是通用的樣本處理方法，無法涵蓋各種樣本，對于一些特殊樣本，建議實驗人員多參考已發表的文獻，自行設計合理的樣本處理方法。

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