微生物（PEPCase）試劑盒（ELISA）

產(chǎn)品簡介：

樣本類型：血清、血漿、組織、細(xì)胞上清或其他生物樣本

檢測方法：雙抗夾心法

儲藏及保存：2-8度，6個月

檢測原理：

將目標(biāo)抗體包被于96孔微孔板中，制成固相載體，向微孔中分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)本，其中的目標(biāo)連接于固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗體，將未結(jié)合的抗體洗凈后再次*洗滌后加入TMB底物顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（O.D.值），計算樣品濃度。

產(chǎn)品內(nèi)容：

實驗所需儀器及設(shè)備：

實驗操作流程：

第一步：試劑盒室溫平衡 30min ，然后從鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

第二步：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL。

第三步：樣本孔中加入待測樣本 50μL；空白孔不加。

第四步：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

第五步：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機洗板）。

第六步：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

第七步：每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 O.D 值。

注：

微生物（PEPCase）試劑盒（ELISA）

僅供體外研究使用，不用于臨床診斷!

為了幫助您更好地解決在實驗中可能碰到的各種問題，我們設(shè)計了這些問題指導(dǎo)，配以試劑盒內(nèi)的說明書一起供您參考使用。很多因素都將導(dǎo)致免疫測定實驗的失敗，而大多數(shù)技術(shù)失誤是可以通過全面閱讀和準(zhǔn)確理解說明書以及實驗步驟來避免的。若對試劑盒內(nèi)的說明書有任何意見和建議，歡迎反饋。我們期待聽到您的聲音，從而完善我們的產(chǎn)品，更好地為您服務(wù)。
◆ 仔細(xì)閱讀說明書
◆ 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過有效期，請勿使用。
◆ 按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）
◆ 標(biāo)本制備要規(guī)范，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。
短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存
◆ 準(zhǔn)備好所有實驗額外所需物品， （比如移液器，試管，清洗器， 酶標(biāo)儀）
◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫，根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
◆ 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件，保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說明書推薦的條件存儲。
◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液（比如沉淀或變色）。有些試劑，比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測稀釋液，可能在設(shè)計時就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前，必需充分混勻。而由于沉淀物的特性，在加入酶標(biāo)板之前，必需不停攪拌。
◆ 保證充分的孵育時間和溫度。
◆ 切勿使用不同生產(chǎn)批號的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。
◆ 在混合或溶解蛋白溶液時，避免泡沫產(chǎn)生。
◆ 在實驗開始之前，安排好實驗流程。
◆ 在實驗開始之前，清潔工作臺。
◆ 若有問題，應(yīng)與我公司或代理商進(jìn)行溝通。